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    • 食品大腸菌群檢測常見問題
    點擊次數(shù)：1587  更新時間：2022-03-16
    1：食品中大腸菌群的檢測有兩個標(biāo)準(zhǔn)三種方法，該如何選擇呢？


    A：依據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的項目單位
    1.1、若單位為CFU/g，則選擇GB 4789.3-2016第二法（平板計數(shù)法）
    1.2、若單位為MPN/g，則選擇GB 4789.3-2016法（MPN計數(shù)法）
    1.3、若單位為MPN/100g，則選擇GB/T 4789.3-2003。

    2：MPN法3個適宜的連續(xù)稀釋度該怎樣選擇？
    A：依據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的項目標(biāo)準(zhǔn)值
    2.1、若標(biāo)準(zhǔn)值為＜3.0MPN/g，則選擇0.1g、0.01g、0.001g三個稀釋度。
    2.2、若標(biāo)準(zhǔn)值為≤30MPN/100g，則選擇1g、0.1g、0.01g三個稀釋度。

    樣品采集

    怎樣采樣，才能使樣品具有代表性？

    這里將樣品分為兩類：預(yù)包裝食品和散裝食品或現(xiàn)場制作食品

    （1）、對于預(yù)包裝食品
    ① 應(yīng)采集相同批次、獨立包裝、適量件數(shù)的食品樣品，每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物項目檢驗的要求。
    ② 獨立包裝小于、等于1000g 的固態(tài)食品或小于、等于1000mL 的液態(tài)食品，取相同批次的包裝。
    ③ 獨立包裝大于1000mL 的液態(tài)食品，應(yīng)在采樣前搖動或用無菌棒攪拌液體，使其達到均質(zhì)后采集適量樣品，放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一件食品樣品；大于1000g 的固態(tài)食品，應(yīng)用無菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品，放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一件食品樣品。

    （2）、對于散裝食品或現(xiàn)場制作食品
    用無菌采樣工具從 n 個不同部位現(xiàn)場采集樣品，放入 n 個無菌采樣容器內(nèi)作為 n 件食品樣品。每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物項目檢驗單位的要求。

    培養(yǎng)基制備過程容易出現(xiàn)問題解答

    1、異?，F(xiàn)象一：培養(yǎng)基不凝固
    原因分析：
    ①制備過程中過度加熱；
    ②低pH造成培養(yǎng)基酸解；
    ③稱量不正確；
    ④瓊脂未*溶解；
    ⑤培養(yǎng)基成分未充分混勻。
    2、異?，F(xiàn)象二：pH不正確
    原因分析：
    ①制備過程中過度加熱；
    ②水質(zhì)不佳；
    ③外部化學(xué)物質(zhì)污染；
    ④測定pH時溫度不正確；
    ⑤pH計未正確校準(zhǔn)；
    ⑥脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。
    3、異?，F(xiàn)象三：顏色異常
    原因分析：
    ①制備過程中過度加熱；
    ②水質(zhì)不佳；
    ③pH不正確；
    ④外來污染；
    ⑤脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。
    4、異?，F(xiàn)象四：產(chǎn)生沉淀
    原因分析：
    ①制備過程中過度加熱；
    ②水質(zhì)不佳；
    ③脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差；
    ④pH計未正確控制。
    5、異常現(xiàn)象五：培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低的生長率
    原因分析：
    ①制備過程中過度加熱；
    ②脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差；
    ③水質(zhì)不佳；
    ④使用成分不正確，如：成分稱量不準(zhǔn)，添加劑濃度不正確；
    ⑤制備容器或水中的有毒殘留物。
    6、異?，F(xiàn)象六：選擇性差
    原因分析：
    ①制備過程中過度加熱；
    ②脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差；
    ③配方使用不對；
    ④添加成分的加入不正確，例如加入添加成分時培養(yǎng)基過熱或添加濃度錯誤；
    ⑤添加劑污染。
    7、異?，F(xiàn)象七：污染
    原因分析：
    ①不適當(dāng)?shù)臏缇?/span>
    ②無菌操作技術(shù)存在問題；
    ③添加劑污染。

    實驗過程

    1、平板法VRBA傾注完，待瓊脂凝固后為什么需要加3-4mL的覆蓋層？
    A：因為大腸菌群是需氧及兼性厭氧的，再加一層瓊脂相當(dāng)于造就一個半?yún)捬醐h(huán)境，促進兼性厭氧菌的生長，同時抑制其他菌的生長。除此之外，還有防止菌落蔓延的作用，防止遷徙性菌落對菌落計數(shù)構(gòu)成影響。例如一些變形桿菌就會有遷徙現(xiàn)象，從而導(dǎo)致菌落長成一片無法區(qū)分。在表面多覆蓋一層培養(yǎng)基就可以避免這種情況的發(fā)生。

    2、GB 4789.3-2016平板法驗證菌落如何挑?。?/span>
    A：分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落數(shù)。按比例挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個，典型大腸菌群有6個。證實實驗應(yīng)該按照可疑跟典型5:3的比例進行挑取，移種于BGLB肉湯管內(nèi)。

    結(jié)果處理


    1.所有稀釋度都不在計數(shù)范圍內(nèi)怎么辦？

    這種情況一般都是低稀釋度的平板都小于15CFU，這種情況就是以低稀釋度的平板菌落數(shù)乘以驗證試驗的比例來計算。例如10倍稀釋的兩個平板上菌落數(shù)分別為10、8，菌落數(shù)為10的平皿挑取10個菌落復(fù)發(fā)酵中有8個菌落產(chǎn)氣，菌落數(shù)為8的平皿挑取8個菌落復(fù)發(fā)酵中有7個菌落產(chǎn)氣，則計算過程是這樣的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g（mL）。

     

    2.連續(xù)兩個稀釋度的四個平皿的菌落數(shù)都在計數(shù)范圍內(nèi)怎么辦？

    這個需要參考菌落總數(shù)檢測國標(biāo)里7.1.2里的公式計算。我們需要先計算每個平皿的驗證后的菌落數(shù)，再代入公式計算即可。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數(shù)為120和125,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數(shù)為17和16，經(jīng)過復(fù)發(fā)酵驗證產(chǎn)氣的管數(shù)分別為7、8、8、8，則我們先計算每個平皿上的菌落數(shù)分別為120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我們計14），16*8/10=12.8（我們計13），然后將84、100、14、13四個數(shù)代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959，結(jié)果應(yīng)報告960CFU/g（mL）。

     

    3.只有一個稀釋度的一個平皿的菌落數(shù)在計數(shù)范圍，其他均不在計數(shù)范圍怎么辦？

    這樣我們只需要復(fù)發(fā)酵驗證這一個平皿即可，根據(jù)這一個平皿的菌落數(shù)進行報告。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數(shù)為160和142,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數(shù)為12和13，則我們只需要從菌落數(shù)為142CFU的平皿里挑取10個菌落進行復(fù)發(fā)酵驗證即可，假如共有7支發(fā)酵管陽性，則應(yīng)計算142*7/10=99.4，結(jié)果報告990CFU/g（mL）。

     


    注意：對于結(jié)果檢出的平板或試管需要經(jīng)過無害化處理（121℃滅菌30分鐘）方能棄去，防止對環(huán)境造成污染



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